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點(diǎn)擊次數(shù):2233 更新時(shí)間:2021-04-07
分子篩為什么可以去除鹽,其實(shí)分子篩本身可以用于去除鹽,如果要更換離子柱,須先去除鹽。否則,蛋白質(zhì)就掛不上了。脫鹽一般可以使用SephadexG10、25和50,也可以使用透析法。
分子篩層分析其應(yīng)用領(lǐng)域主要包括以下幾點(diǎn)
1)脫鹽
高分子(蛋白質(zhì)、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質(zhì)可以通過(guò)分子篩層分析去除,這種操作被稱為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)單快捷,蛋白質(zhì)和酶類等在脫鹽過(guò)程中不易失活,樣品體積到柱床體積的25%-30%,為了防蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度下降,沉淀吸附在柱子上,一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類緩沖液平衡分析柱,加入樣品,用同樣的緩沖液清洗,收集的清洗液用冷凍干燥法清除揮發(fā)性鹽類。
2)分離純化
分子篩層分析廣泛應(yīng)用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質(zhì)的分離。
43)測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量:
用一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品放入同一凝膠柱中,在同一條件下分析,記錄每分鐘成分的清洗體積,用清洗體積對(duì)分子量的對(duì)數(shù)作圖,在分子量范圍內(nèi)可以得到直線,即分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在測(cè)未知物質(zhì)的分子量時(shí),可將該樣品放入測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線的凝膠柱中清洗后,根據(jù)物質(zhì)的清洗體積,在標(biāo)準(zhǔn)曲線中檢測(cè)出分子量。
分子篩層析時(shí)分離效果依賴于以下因素
填料的顆粒大小
填料顆粒的均勻程度
裝柱的好壞
樣品的體積和黏度
流速
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